Voolutsütomeetria on aastaid tuntud ja onkoloogias laialt kasutatav diagnostiline ja uurimistehnika. Voolutsütomeetria võimaldab rakke, mis moodustavad suspensiooni laminaarses või kihistunud vedelikus, uurida seadmega, mida nimetatakse voolutsütomeetriks. Millised on voolutsütomeetria näidustused ja kuidas seda tehakse?
Hematoloogiliste neoplasmade diagnoosimisel kasutatakse voolutsütomeetriat, kuna need on vedelad kasvajad, kuid see on ainult abimeetod. Siiski tasub meeles pidada, et on olemas üks vähk, mida saab diagnoosida ainult selle meetodi abil. See on krooniline lümfoidne leukeemia.
Teiste neoplastiliste haiguste korral kasutatakse voolutsütomeetriat diagnostilise abivahendina, kuna see näitab neoplastiliste rakkude väga olulisi tunnuseid. Seda meetodit kasutatakse ka rakendatud ravi tõhususe hindamiseks.
Voolutsütomeetria - mida see näitab?
Katseosakesi sisaldav vedeliku voog juhitakse konstantsel kiirusel (100–2000 osakest sekundis) läbi tsütomeetri mõõtepiirkonna. Siin analüüsitakse optiliste meetoditega rakkude kuju, mõõtmeid, rakkude sisemist struktuuri ja nende sisu, nt DNA-d. Kõik rakud on optiliselt märgistatud.
Mõõtmised põhinevad laservalguse hajuvusomadustel üksikute rakkude või nende komponentide (tuumade, kromosoomide, mitokondrite) poolt või nende poolt indutseeritud fluorestsentsil.
Optilised signaalid muudetakse elektrisignaalideks, mis pärast analüüsi esitatakse graafiliselt mono- või biparameetriliste jaotustena.
Tsütomeeter võimaldab osakeste segregatsiooni ka pärast mõõtetsoonist väljumist. Võib öelda, et aparaat korraldab (eraldab) rakud samade koostisosadega (preparatiivne sort) või ekstraheerib teatud tüüpi rakke (analüütiline sort).
Voolutsütomeetria võimaldab uurida rakkude populatsiooniomadusi, rakukomponentide (eriti nagu nukleiinhapped, valgud, pinna- ja raku antigeenid), ensümaatilise aktiivsuse, membraanipotentsiaali, mitokondriaalse aktiivsuse, rakusisese pH, ioonitranspordi ja membraani voolavuse analüüsi.
Voolutsütomeetria - rakendus
Diagnostikas kasutatav voolutsütomeetria võimaldab määrata neoplastiliste rakkude fenotüübi ja üksikute valkude ekspressiooni. Selle saavutamiseks kasutatakse märgistatud fluorestseeruvaid antikehi, mis seonduvad iseloomulikul viisil rakumembraani pinnal olevate antigeenidega. Tänu sellele on võimalik kindlaks teha nende diferentseerumise aste, päritolu, prognostilised ja terapeutilised markerid, mis hõlbustavad edasiste diagnostiliste ja raviprotseduuride üle otsustamist.
Voolutsütomeetria teine rakendus on rakendatud ravi efektiivsuse jälgimine, hinnates nn "jääkhaigus" - kasvaja-sarnaste fenotüüpidega rakkude osakaal, mis jääb pärast ravi alles.
Voolutsütomeetria hõlbustab ka vähi uurimist. Tänu sellele meetodile on võimalik otsida näiteks neoplastiliste rakkude pinnal olevaid retseptoreid, mis võivad saada ravi sihtmärkideks.
Meetod võimaldab hinnata valkude aktiivsust rakus. Samuti on võimalik hinnata rakutsüklit, näiteks määrates rakus oleva DNA hulga.
Proliferatsiooni käigus läbib rakk rakutsükli faaside kaudu, kus see kahekordistab DNA kogust. Selle koguse hindamisel on võimalik näidata, millises faasis on rakud, kas nad paljunevad või mitte või on nad apoptoosi minemas. Teisisõnu, voolutsütomeetria abil saate teada, kas rakud valmistuvad apoptoosiks, programmeeritud surmaprotsessiks.
Voolutsütomeetria - tulevik
Voolutsütomeetriat on meditsiinis teada ja kasutatud juba mitu aastakümmet. Kuid seda täiendatakse pidevalt ja see loob uusi diagnostilisi ja uurimisvõimalusi. Selle meetodi kasutamise esimesel perioodil oli võimalik määrata ainult rakkude suurus ja granuleerituse aste.
Laservalguse kasutamine voolutsütomeetrilistes seadmetes võimaldab teil ergastada teatud fluorestsentsmarkereid ja seejärel hinnata nende emissiooni. Kaasaegsed tsütomeetrid võimaldavad märkimisväärselt suurendada korraga hinnatavate markerite arvu, mis kindlasti tähendab ka selle meetodi tundlikkuse suurenemist.
Sellepärast kasutatakse seda mitte ainult neoplastiliste haiguste diagnoosimisel, vaid ka ravi efektiivsuse hindamiseks.
Autori kohta
Loe veel selle autori artikleid
